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Cryo-tomographie électronique de spécimens vitrifiés en films minces

Environnement scientifique et technique de la formation

Institut de génétique et développement de Rennes - UMR 6290

RESPONSABLES

Denis CHRETIEN

Directeur de recherche

UMR 6290

Claire HEICHETTE

Technicienne

UMR 6290

Sophie CHAT

Ingénieure d'études

UMR 6290

LIEU

RENNES (35)

ORGANISATION

5 jours
De 2 à 4 stagiaires
TP en binômes avec 1 intervenant par binôme

COÛT PÉDAGOGIQUE

2400 Euros

A L'ISSUE DE LA FORMATION

Evaluation de la formation par les stagiaires
Envoi d'une attestation de formation

DATE DU STAGE

18232 : du lundi 17/09/2018 au vendredi 21/09/2018

Janvier Février Mars Avril
Mai Juin Juillet Août
Sept.
18232
Oct. Nov. Déc.

OBJECTIFS

- Acquérir les bases théoriques de la cryo-tomographie électronique
- Savoir préparer un spécimen vitrifié en présence de marqueurs fiduciaires (nanoparticules d'or)
- Savoir acquérir des séries d'images inclinées en faible dose d'électrons
- Savoir reconstruire en 3D des cryo-tomogrammes à partir de séries d'images inclinées

PUBLIC

Chercheurs, ingénieurs, techniciens. Afin d'adapter le programme aux attentes des stagiaires, un questionnaire téléchargeable ICI sera à compléter et à renvoyer avant le début du stage.

PRÉREQUIS

Bases théoriques en microscopie électronique en transmission

PROGRAMME

L'objectif de ce stage essentiellement pratique est d'apporter suffisamment d'autonomie aux stagiaires afin qu'ils puissent mettre en œuvre la cryo-tomographie électronique dans leur service ou participer à des acquisitions et/ou analyses sur des plateformes de cryo-microscopie électronique de partenaires.

Cours (4 h)
- Introduction à la microscopie électronique
- Introduction à la cryo-tomographie électronique
- Limites et perspectives de la cryo-tomographie électronique

Ateliers pratiques (27 h)
- Préparation des spécimens en présence de marqueurs fiduciaires
- Vitrification des spécimens en films minces
- Acquisition de données par cryo-tomographie électronique simple axe
- Reconstructions 3D à l'aide du logiciel IMOD
- Analyse des données sous 3Dmod
- Visualisation sous UCSF Chimera

Les échantillons biologiques (virus, axonèmes...) seront fournis lors de la formation.

La dernière demi-journée (4 h) sera consacrée à l'analyse de cas posés par les stagiaires (questions spécifiques, éventuelles problématiques professionnelles, etc.)

EQUIPEMENTS

- Appareil de vitrification sous atmosphère contrôlée (Leica EM GP)
- Cryo-microscope électronique 200 kV équipé d'une caméra CCD (Tecnai G2 T20 Sphera, Gatan USC4000)
- Stations graphiques (Mac Pro équipés de cartes graphiques NVIDIA)

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