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HPLC préparative appliquée à la purification de peptides

RESPONSABLES

Pascal VERDIE

Ingénieur de recherche

UMR 5247

Luc BRUNEL

Ingénieur d'études

UMR 5247

LIEU

MONTPELLIER (34)

ORGANISATION

2 jours
De 4 à 6 stagiaires
TP encadrés par 1 intervenant pour 3 stagiaires maximum

COÛT PÉDAGOGIQUE

1300 Euros

A L'ISSUE DE LA FORMATION

Evaluation de la formation par les stagiaires
Envoi d'une attestation de formation

DATE DU STAGE

19210 : du mardi 12/03/2019 au mercredi 13/03/2019

Janvier Février Mars
19210
Avril
Mai Juin Juillet Août
Sept. Oct. Nov. Déc.

OBJECTIFS

- Connaître les paramètres critiques et facteurs d'influence du procédé de purification des peptides par HPLC (high pressure liquid chromatography)
- Etre capable d'optimiser le protocole de purification en fonction des critères définis
- Etre capable de transposer le changement d'échelle (analytique à préparative)

PUBLIC

Cadres et techniciens du département industrialisation, production et R&D

PRÉREQUIS

Niveau Bac + 2 minimum en chimie ou en biologie

PROGRAMME

Partie théorique (40 %)
- Les différentes méthodes de chromatographie pour la purification des composés
- Grandeurs fondamentales (rétention, résolution et efficacité) et facteurs d'influence associés
- Analyse des peptides par HPLC et LC-MS
- Evaluation de l'efficacité d'une colonne en fonction de la phase stationnaire, du diamètre, de la porosité, du type de greffage et de la capacité de charge
- Domaine de stabilité de la colonne en fonction de sa structure et du pH des éluants
- Préparation de l'échantillon : concentration, solvant, volume, température, type d'injection (boucle, loading, tête de colonne)
- Phase mobile : nature des éluants et influence du conditionnement de la colonne (durée, composition initiale)
- Comparaison des méthodes de séparation en mode gradient ou isocratique
- Validation d'une méthode de nettoyage d'une colonne et évaluation de l'efficacité de la colonne dans le temps
- Présentation des différents appareillages de purification
- Stratégies de collecte en mode préparative

Partie pratique (60 %)
- Préparation de l'échantillon avant injection
- Conditionnement de la colonne avant injection
- Mesure du volume mort de l'équipement de façons théorique et expérimentale
- Influence du brut de synthèse sur la qualité de la séparation
- Mise au point d'une méthode de séparation en fonction des propriétés de la molécule à purifier et de la problématique générale (choix entre pureté ou quantité et mg ou g)
- Mise au point et optimisation d'une séparation en mode gradient d'élution
- Transposition de méthodes : de l'analytique vers la préparative

EQUIPEMENT

Instruments LC-DAD-MS des sociétés Agilent (1260-6100) et HPLC préparative des sociétés Gilson (PLC 2250) et Novasep (LC 80)

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