Cytométrie en flux : avantages et limites de la cytométrie conventionnelle et spectrale Présentiel

Cette formation permet aux participants d'acquérir et d'identifier les apports et les limites de la cytométrie conventionnelle et de la cytométrie spectrale.

1er jour (matin) : présentation générale des deux technologies : principes, avantages et limites

• Présentation du principe de fonctionnement d'un cytomètre en flux en détaillant les similitudes et différences d'acquisition
• Traitement du signal en fonction des deux approches : les compensations entre fluorescences et la déconvolution des spectres

1er jour (après-midi) : présentation des bonnes pratiques :

• Panel design : présentation d'un workflow pour concevoir des panels multi-couleurs en cytométrie conventionnelle et spectrale
• Contrôles et standardisation : présentation de l'importance de la titration des anticorps, des contrôles expérimentaux et de marquages. Puis seront abordés les paramètres à l'optimisation des expériences. On présentera ensuite la standardisation à réaliser sur des expérimentations de longue durée (semaines, mois, années)

2ème jour (matin) : acquisition d'échantillons pour un panel de 12 couleurs en cytométrie conventionnelle et en cytométrie spectrale :

• Acquisition des contrôles des tubes expérimentaux sur les deux technologies
• Compensation/ Unmixing-Spillover, soustraction de l'auto fluorescence

2ème jour (après-midi) : présentation des analyses sur les différentes données acquises

La partie théorique est réalisée en cours magistral à l'aide d'une présentation remise aux participants lors de la formation. La partie pratique est réalisée par sous-groupes de 4 stagiaires encadrés par deux intervenantes, sur deux cytomètres (BD Fortessa et Cytek Aurora/Northern Lights), avec des échantillons préparés au préalable.

• Appliquer les principes de chaque technologie (conventionnelle et spectrale)
• Analyser les apports et les limites de chaque technologie
• Utiliser un cytomètre conventionnel (BD Fortessa) et un cytomètre spectral (Northern Lights)

Cytomètre BD Fortessa avec le logiciel d'analyse DIVA

Cytomètre Cytek Northern Lights avec le logiciel SpectroFlo

Des supports papier et/ou dématérialisés seront remis aux participants à l'issue de la formation.