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Du gène à la protéine

Environnement scientifique et technique de la formation

Laboratoire de biologie moléculaire eucaryote

- UMR 5099
RESPONSABLE

Kamila BELHABICH-BAUMAS

Ingénieure d'études

UMR 5099

LIEU

TOULOUSE (31)

ORGANISATION

5 jours
De 4 à 8 stagiaires
TP en sous-groupes de 4 stagiaires maximum avec 1 intervenant par sous-groupe

COÛT PÉDAGOGIQUE

1800 Euros

A L'ISSUE DE LA FORMATION

Evaluation de la formation par les stagiaires
Envoi d'une attestation de formation

DATE DU STAGE

20216 : du lundi 25/05/2020 au vendredi 29/05/2020

Janvier Février Mars Avril
Mai
20216
Juin Juillet Août
Sept. Oct. Nov. Déc.
OBJECTIFS
-

Acquérir les bases de la biologie moléculaire et de la biochimie des protéines pour produire, extraire et analyser les protéines recombinantes
-

Savoir utiliser le logiciel Clone Manager pour réussir son clonage et la production de protéines in silico
-

Savoir choisir la méthode appropriée pour détecter les protéines recombinantes

PUBLICS
Ingénieurs, chercheurs et techniciens en biologie, pharmacologie, chimie et/ou biophysique

Prérequis : connaissances de base en biologie moléculaire et en génie génétique. Avoir suivi le stage "De la biologie moléculaire au génie génétique : théorie et pratique" (Réf. 20215, ce catalogue) ou niveau équivalent
PROGRAMME
Cours (17,5 h)
- De la cellule au gène : rappels sur le transfert de l'information génétique ou expression d'un gène (transcription, traduction) ; notions de mutations
- Les éléments nécessaires à la surexpression d'un gène : choix du vecteur et choix de la cellule hôte
- Rappel sur l'amplification de l'ADN insert par PCR
- Méthodes de fusion de gènes et d'étiquetage de protéines : par clonage / étiquetage d'un gène dans un vecteur par la méthode des enzymes de restriction, par la méthode "In-Fusion", par recombinaison homologue et par la méthode "CRISPR-Cas9"
- Méthodes de mise en évidence de l'expression génique ou de la production de protéines recombinantes, détections par Western Blot (principe de l'immunodétection par chimioluminescence, par la phosphatase alcaline (PhoA) et par fluorescence)

Travaux pratiques et dirigés (17,5 h)

- Travaux dirigés sur les PCR et sur le clonage en respectant le cadre ouvert de lecture : utilisation du logiciel "Clone Manager V 9"
- Mise en culture des cellules bactériennes en conditions stériles et induction de l'expression d'un gène par l'IPTG
- Extraction des protéines totales, dosages, dépôts sur 2 gels et migration, visualisation des protéines sur 1 gel, transfert des protéines du 2ème gel sur membrane nitrocellulose, visualisation des protéines sur membrane
- Identification de la protéine recombinante par Western Blot, utilisation d'anticorps secondaires couplés à la PhoA
EQUIPEMENT
Il est demandé aux stagiaires de venir avec leur propre ordinateur portable avec les droits administrateurs afin de pouvoir installer en début de stage les logiciels nécessaires à la formation.
INTERVENANTS
K. Belhabich-Baumas (ingénieure) et L. Hellaudais (technicienne)
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